胰蛋白酶

胰蛋白酶是從牛、豬、羊的胰臟提取，純化獲得的結(jié)晶，再制成的凍干制劑。易溶于水，不溶于三氯甲烷、乙醇、乙醚等有機(jī)溶劑。在pH1.8時(shí)，短時(shí)間煮沸幾乎不失活；在堿溶液中加熱則變性沉淀，Ca2+有保護(hù)和激活作用，胰蛋白酶的等電點(diǎn)為pH10.1。

牛胰蛋白酶原有229個(gè)氨基酸組成，含6對(duì)二硫鍵，其氨基酸排列順序和晶體結(jié)構(gòu)已被闡明。在腸激酶活自身催化下，酶原的N末端賴氨酸與異亮氨酸殘基之間的肽鍵被水解，釋放出來(lái)纈-天-天-天-天-賴6肽，生成有活性的胰蛋白酶。牛的胰蛋白酶氨基酸殘基223個(gè)，分子量23800 ，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。

豬胰蛋白酶的化學(xué)結(jié)構(gòu)與牛胰蛋白酶十分相似，在氨基酸殘基排列順序中，只有41個(gè)氨基酸殘基不同，但分子構(gòu)型有很大區(qū)別。沉降系數(shù)S20W為2.77S，pI=10.8，熱穩(wěn)定性較牛胰蛋白酶穩(wěn)定，Ca2+對(duì)酶的保護(hù)作用不及牛羊的明顯，無(wú)螯合Ca2+的中心部位。有6對(duì)二硫鍵，斷裂1~2個(gè)鍵，均不至于破壞酶分子的完整結(jié)構(gòu)而保護(hù)了酶的活性。酶的活力分別相當(dāng)于牛的72%及羊的61%。

羊胰蛋白酶與牛、豬的相似，但其活力略高于牛和豬的。

胰蛋白酶專(zhuān)一作用有堿性氨基酸精氨酸及賴氨酸羧基所組成的肽鍵。酶本身很容易自溶，由原先的β-胰蛋白酶酶轉(zhuǎn)化為α-胰蛋白酶，再進(jìn)一步降解為擬胰蛋白酶，乃至碎片，活力也逐步下降而喪失。

除存在于脊椎動(dòng)物外，還存在于蠶、海盤(pán)車(chē)、蝲姑、放線菌等范圍廣泛的生物體中。另外與高等動(dòng)物的血液凝固和炎癥等有關(guān)的凝血酶、纖溶酶、舒血管素等蛋白酶在化學(xué)結(jié)構(gòu)和特異性等方面與胰蛋白酶具有密切的關(guān)系，可以認(rèn)為這些酶是從共同的祖先酶在進(jìn)化過(guò)程中分化而來(lái)的。胰糜蛋白酶與彈性蛋白酶在結(jié)構(gòu)和催化機(jī)制方面也具有密切關(guān)系，但其特異性則完全不同。

胰蛋白酶系自牛、羊或豬胰中提取的一種蛋白水解酶。中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定按干燥品計(jì)算，每1mg 的效價(jià)不得少于2500單位。 由牛、羊、豬胰臟提取而得的一種肽鏈內(nèi)切酶，只斷裂賴氨酸或精氨酸
的羧基參與形成的肽鍵。白色或米黃色結(jié)晶性粉末。溶于水，不溶于乙醇、甘油、氯仿和乙醚。分子量24 000，pI 10.5，最適pH值7.8～8.5左右。pH>9.0不可逆失活。Ca2+對(duì)酶活性有穩(wěn)定作用；重金屬離子、有機(jī)磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶抑制劑對(duì)其活性有強(qiáng)烈抑制。臨床用于抗炎消腫，工業(yè)上用于皮革制造、生絲處理、食品加工等。

本品系自豬、羊或牛胰中提取的蛋白分解酶。按干燥品計(jì)算，每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位。

本品應(yīng)從檢疫合格的牛、羊或豬胰中提取，生產(chǎn)過(guò)程應(yīng)符合現(xiàn)行版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。

本品為白色或類(lèi)白色結(jié)晶性粉末。

取本品約2mg，置白色點(diǎn)滴板上，加對(duì)甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯鹽酸鹽試液0.2ml,攪勻，即顯紫色。

酸度

取本品，加水溶解并制成每1ml中含2mg的溶液，依法測(cè)定（2010年版藥典二部附錄ⅥH），pH值應(yīng)為5.0～7.0。

溶液的澄清度

取本品，加0.9%氯化鈉溶液溶解并制成每1ml中含10mg的溶液，依法檢查（2010年版藥典二部附錄ⅨB），溶液應(yīng)澄清。

糜蛋白酶-底物溶液的制備

取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯23.7mg，置100ml量瓶中，加磷酸鹽緩沖液（取0.067mol/L磷酸二氫鉀溶液38.9ml與0.067mol/L磷酸氫二鈉溶液61.1ml，混合，pH值為7.0）50ml，溫?zé)崾谷芙?，冷卻后再稀釋至刻度，搖勻。冰凍保存，但不得反復(fù)凍融。

供試品溶液的制備

取本品適量，精密稱(chēng)定，加0.001mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中含0.25mg的溶液。

測(cè)定法

取底物溶液2.0ml、0.001mol/L鹽酸溶液0.2ml與上述磷酸鹽緩沖液（pH 7.0）1ml，混勻，作為空白。取供試品溶液0.2ml與底物溶液（預(yù)熱至25℃±0.5℃）3.0ml，立即計(jì)時(shí)并搖勻，使比色池內(nèi)的溫度保持在25℃±0.5℃，照紫外－可見(jiàn)分光光度法（2010年版藥典二部附錄ⅣA），在237nm的波長(zhǎng)處，每隔30秒讀取吸光度，共5分鐘，每30秒鐘吸光度的變化率應(yīng)恒定，且恒定時(shí)間不得少于3分鐘。以吸光度為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)。

A2為直線上開(kāi)始的吸光度；

A1為直線上終止的吸光度；

T為A2至A1讀數(shù)的時(shí)間，分；

W為測(cè)定液中含供試品的量，mg;

0.0075為在上述條件下，吸光度每分鐘改變0.0075，即相當(dāng)于1個(gè)糜蛋白酶單位。

每2500單位胰蛋白酶中不得多于50單位的糜蛋白酶。

干燥失重

取本品適量，以五氧化二磷為干燥劑，在60℃減壓干燥4小時(shí)，減失重量不得過(guò)5.0%（2010年版藥典二部附錄ⅧL）。

底物溶液的制備

取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯鹽酸鹽85.7mg，加水溶解使成100ml，作為底物原液；取10ml，用磷酸鹽緩沖液（取0.067mol/L磷酸二氫鉀溶液13ml與0.067mol/L磷酸氫二鈉溶液87ml混合，pH值為7.6）稀釋成100ml，照紫外－可見(jiàn)分光光度法（2010年版藥典二部附錄Ⅳ A），恒溫于25.0℃±0.5℃，以水作空白，在253nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，必要時(shí)可用上述底物原液或磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)，使吸光度在0.575～0.585之間，作為底物溶液。制成后應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用。

供試品溶液的制備

精密稱(chēng)取本品適量，加0.001mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中含50～60胰蛋白酶單位的溶液。

測(cè)定法

取底物溶液3.0ml，加0.001mol/L鹽酸溶液200μl，混勻，作為空白。另取供試品溶液200μl，加底物溶液（恒溫于25.0℃±0.5℃）3.0ml，立即計(jì)時(shí)，混勻，使比色池內(nèi)的溫度保持在25℃±0.5℃，照紫外－可見(jiàn)分光光度法（2010年版藥典二部附錄Ⅳ A），在253nm的波長(zhǎng)處，每隔30秒鐘讀取吸光度，共5分鐘。以吸光度為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)，作圖；每30秒鐘吸光度的改變應(yīng)恒定在0.015～0.018之間，呈線性關(guān)系的時(shí)間不得少于3分鐘。若不符合上述要求，應(yīng)調(diào)整供試品溶液的濃度，再作測(cè)定。在上述吸光度對(duì)時(shí)間的關(guān)系圖中，取成直線部分的吸光度，

A1為直線上終止的吸光度；

A2為直線上開(kāi)始的吸光度；

T為A1至A2讀數(shù)的時(shí)間，分；

W為測(cè)定液中含供試品的量，mg；

0.003為在上述條件下，吸光度每分鐘改變0.003，即相當(dāng)于1個(gè)胰蛋白酶單位。

注射用胰蛋白酶 

胰蛋白酶

血液生化檢查> 酶類(lèi)測(cè)定

同酶速率法測(cè)定。

同酶速率法測(cè)定。

同酶速率法測(cè)定。

（1）RIA法：陰性。

（2）酶速率法（37℃）：十二指腸液：150～600μg/ml

（1）升高：急性胰腺炎、慢性胰腺炎（復(fù)發(fā)期）、胰腺癌、腎功能不全等。

（2）降低：胰腺外分泌功能不全（慢性胰腺炎后期）。

急性胰腺炎時(shí)血清胰蛋白酶可上升至正常人的2～400倍，一般在10～15天恢復(fù)正常。

急性胰腺炎、慢性胰腺炎、胰腺癌 

胰蛋白酶為肽鏈內(nèi)切酶，對(duì)精氨酸和賴氨酸肽鏈具有選擇性水解作用，可使天然蛋白、變性蛋白、纖維蛋白和黏蛋白等水解為多肽或氨基酸。由于血清中含有非特異性抑肽酶，故胰蛋白酶不會(huì)消化正常組織，而能分解黏痰、膿性痰等黏性分泌物，能促進(jìn)抗生素、化療藥物向病灶滲透。

1.用于膿胸、血胸、外科炎癥、潰瘍、創(chuàng)傷性損傷、婁管等所產(chǎn)生的局部水腫、血腫、膿腫。

2.用于呼吸道疾患溶解黏痰和膿性痰。

3.用于治療毒蛇咬傷，曾試用于竹葉青、銀環(huán)蛇、眼鏡蛇、蝮蛇等毒蛇咬傷的各型病人800余例，均獲治愈。

1.肝腎出血、出血傾向及結(jié)核性膿腫患者禁用。

2.不可用于急性炎癥及出血空腔中。

1.每次2.5～5mg，用蒸餾水5～10ml溶解。

2.一般應(yīng)用：1次5000單位，每日1次肌注，用量酌情而定。為防止疼痛，可加適量普魯卡因。局部用藥視情而定，可配成溶液制劑（PH7.4～8.2，微堿性時(shí)活性最強(qiáng)）、噴霧劑、粉劑、油膏等，用作體腔內(nèi)注射、患部注射、噴霧、濕敷、涂搽等。

3.治蛇毒：取注射用結(jié)晶胰蛋白酶2000單位1～3支，加0.25%～0.5%鹽酸普魯卡因（或注射用水）4～20ml稀釋?zhuān)匝篮蹫橹行?，在傷口周?chē)鹘?rùn)注射，或在腫脹部位上方作環(huán)狀封閉1～2次。如病情需要可重復(fù)使用。若傷肢腫脹明顯，可于注射本品30分鐘后，切開(kāi)傷口排毒減壓（嚴(yán)重出血者例外），也可在腫脹部位針刺排毒。如傷口已壞死、潰爛，可用其0.1%溶液濕敷患處

1.不可作靜注。用前需作劃痕試驗(yàn)，應(yīng)注意可能產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)。

2.吸取注射液后應(yīng)另?yè)Q針頭，以免注射時(shí)疼痛。

3.外用時(shí)，可采用注射用制劑以緩沖液溶解，但必須在3小時(shí)內(nèi)用畢。

1．注射局部疼痛、硬結(jié)。

2．本品可引起組胺釋放，產(chǎn)生全身反應(yīng)，有寒戰(zhàn)、發(fā)熱、頭痛、頭暈、胸痛、腹痛、
皮疹、血管神經(jīng)性水腫、呼吸困難、眼壓升高、白細(xì)胞減少等。癥狀輕時(shí)不影響繼續(xù)治療，給予抗組胺藥和對(duì)癥藥物即可控制，嚴(yán)重時(shí)應(yīng)即停藥。

3．本品偶可致過(guò)敏性休克。

胰蛋白酶能使痰、血凝塊溶化變稀，易于引流排痰，加速創(chuàng)面愈合凈化，促進(jìn)肉芽組織增生，而不損傷正常組織，臨床上有消炎消腫功能。 

胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在 pH 為 8.0 、溫度為 37℃ 時(shí)，胰酶溶液的作用能力最強(qiáng)。使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。因 Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含 Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ，如： D-Hanks 液。終止消化時(shí)，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。

1. 稱(chēng)取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為 0.25 %，用電子天平準(zhǔn)確稱(chēng)取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水（若用雙蒸水需要調(diào) PH 到 7.2 左右）或 PBS （ D-hanks ）液中。攪拌混勻，置于 4℃ 內(nèi)過(guò)夜。

2. 用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超凈臺(tái)內(nèi)用注射濾器（ 0.22 微米微孔濾膜）抽濾除菌。